HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究

doi:10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2011.03.023

科研成果详情

题名	HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究
其他题名	Preparation and application of a novel HCV diagnostic antigen fused to streptavidin
作者	张庭瑛 1; 鲁健 2; 赵敏 1; 赵国霞1; 邓瑶 2; 毕胜利 2; 高基民1; 谭文杰 2
发表日期	2011-06-30
发表期刊	中华实验和临床病毒学杂志影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	学术期刊
关键词	肝炎病毒属抗原抗生蛋白链菌素病毒融合蛋白质素
其他关键词	Hepatovirus ; Antigens ; Streptavidin ; Viral fusion proteins
摘要	目的制备带有链亲和素(SA)标签的丙型肝炎病毒(HCV)融合蛋白,并初步探讨其在抗-HCVELISA检测中的应用。方法构建了HCV诊断抗原与链亲和素融合蛋白重组表达质粒pET-11d-C44P-SA,在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,并用WesternBlot进行鉴定,表达的融合蛋白经镍金属螯合(Ni-NTA)层析柱进行纯化,透析复性后分别包被生物素化以及普通酶联板,进行人血清抗-HCV检测。结果成功构建了带有SA标签的重组表达质粒,其在大肠埃希菌BL21(DE3)中实现高效表达,制备的融合蛋白纯度可达90%以上。建立ELISA法进行人血清抗-HCV检测显示:融合蛋白包被生物素化酶联板检测灵敏度与特异性明显高于普通酶联板。结论构建的融合蛋白作为包被抗原,结合利用SA标签与生物素化酶联板,明显提高了抗-HCV检出的灵敏度与特异性,该策略为进一步提高抗-HCV检测试剂的质量打下了基础。
其他摘要	Objective To prepare streptavidin-tagged hepatitis C virus (HCV)fusion protein and explore its application for the detection of antibody against HCV infection.Methods A recombinant plasmid pET-lld-C44P-SA was constructed,which coding a novel HCV diagnostic antigens(C44P)and streptavidin(SA)fusion protein,and the fusion protein was generated with BL21(DE3)E Coli and identified by Western Blot analysis.Then the fusion protein was purified through the Ni-NTA affinity chromatography and over 90% purity has been achieved.Anti-HCV ELISAs were developed when the fusion protein was used in the biotin-pre-coated microplate or ordinary microplate,and then the sensitivity and specificity of the ELISA were evaluated with confirmed human sera panels.Results The fusion protein was expressed in high yields and purified successfully,the ELISA detection of anti-HCV with human sera panel indicated that its sensitivity and specificity is higher when SA-tagged HCV antigen (C44P-SA)coated in biotin-pre-coated microplate,compared to C44P or C44P-SA coated in ordinary microplate.Conclusion The sensitivity and specificity of anti-HCV ELISA can be improved when a novel HCV diagnostic antigen fused to SA combined with the biotin- pre-coated microplate.This study laid a foundation for improving the performance of HCV diagnostics.
资助项目	十一五传染病重大专项（2009ZX10004-715）
ISSN	1003-9279
卷号	25 期号:03 页码:230-232
DOI	10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2011.03.023
页数	0
收录类别	CNKI ; 万方 ; 北大核心 ; PKU ; CSCD ; ISTIC
学科领域	医药、卫生 ; 临床医学
URL	查看原文
CSCD记录号	CSCD:4250789
万方分类号	R512.6(传染病)
引用统计
文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/74169
专题	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_病原生物学研究室
作者单位	1.温州医学院医学病毒学研究所; 2.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室
第一作者单位	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_病原生物学研究室
第一作者的第一单位	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_病原生物学研究室
推荐引用方式 GB/T 7714	张庭瑛,鲁健,赵敏,等. HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究[J]. 中华实验和临床病毒学杂志,2011,25(03):230-232.
APA	张庭瑛., 鲁健., 赵敏., 赵国霞., 邓瑶., ... & 谭文杰. (2011). HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究. 中华实验和临床病毒学杂志, 25(03), 230-232.
MLA	张庭瑛,et al."HCV免疫学诊断抗原与链亲和素融合蛋白的制备及应用研究".中华实验和临床病毒学杂志 25.03(2011):230-232.