人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定

doi:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002373

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题名	人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定
其他题名	Prokaryotic Expression and Characterization of Two Recombinant Receptor-binding Domain(RBD) Proteins of Human Coronavirus NL63(HCoV-NL63)
作者	常慧 1,2; 伊瑶 2; 赵敏 2,3; 周为民 2; 赵国霞2,3; 王慧娟 2; 毕胜利 2; 高基民3; 刘冰 1; 谭文杰2,3
发表日期	2013
发表期刊	病毒学报影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	学术期刊
关键词	HCoV-NL63 受体结合区蛋白重组蛋白表达大肠杆菌
摘要	人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD大片段(RL:232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。
其他摘要	The receptor-binding domain(RBD)protein of HCoV-NL63is a major target in the development of diagnostic assay and vaccine,it has a pivotal role in receptor attachment,viral entry and membrane fusion.In this study,we prepared 2purified recombinant HCoV-NL63RBD proteins using in E.coli system and identified the proteins by Western blotting.We first optimized codon and synthesized the RL (232-684aa)coding gene,then amplified the RL or RS(476-616aa)coding gene via PCR using different primers.The RL or RS coding gene was cloned into the pM48expression vector fused with TrxA tag. The RBD(RL and RS)of HCoV-NL63were expressed majorly as inclusion body when expressed in E.coli BL21pLys S under different conditions.The expressed products were purified by affinity chromatography then analyzed by SDS-PAGE and Western blotting.Our results showed that the recombinant RBD proteins were maximally expressed at 37℃with 0.8mM IPTG induction for 4h.RL or RS protein with 95%purity was obtained and reacted positively with anti-sera from mice immunized with the recombinant vaccinia virus (Tiantan strain)in which HCoV-NL63RL or RS protein was expressed.In conclusion,the purified recombinant RBD proteins(RL and RS)derived from E.coli were first prepared in China and they might provide a basis for further exploring biological role and vaccine development of HCoV-NL63.
资助项目	国家863课题（2007AA02Z464）;传染病重大专项（2008ZX10004-014）
ISSN	1000-8721
卷号	29 期号:02 页码:106-111
DOI	10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002373
页数	6
收录类别	CNKI ; 北大核心 ; CSCD
学科领域	医药、卫生 ; 基础医学
URL	查看原文
CSCD记录号	CSCD:4805353
CNKI分类号	R373.1
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文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/65829
专题	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_病原生物学研究室
作者单位	1.吉林大学白求恩医学院遗传学系; 2.中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 3.温州医学院医学病毒学研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	常慧,伊瑶,赵敏,等. 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定[J]. 病毒学报,2013,29(02):106-111.
APA	常慧., 伊瑶., 赵敏., 周为民., 赵国霞., ... & 谭文杰. (2013). 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定. 病毒学报, 29(02), 106-111.
MLA	常慧,et al."人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定".病毒学报 29.02(2013):106-111.

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BDXB201302004.CAJ（460KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	浏览下载