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题名SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究
其他题名Research on expression, purification and characterization of the SHV-4 extended-spectrum-β-lactamase in pET26b/BL(DE3)
作者
发表日期2007-01-25
发表期刊温州医学院学报   影响因子和分区
语种中文
原始文献类型学术期刊
关键词超广谱β-内酰胺酶 SHV-4 表达 纯化 特性
摘要目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0~8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。
资助项目浙江省科技厅科研基金重点资助项目(2004C23018)。
ISSN1000-2138
卷号37期号:01页码:1-4
DOI10.3969/j.issn.1000-2138.2007.01.001
页数4
收录类别CNKI ; 万方 ; ISTIC
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文献类型期刊论文
条目标识符https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/134918
专题眼视光学院(生物医学工程学院)、附属眼视光医院
检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心)
仁济学院_检验与生命科学学部
作者单位
1.温州医学院检验与生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室;
2.温州医学院检验与生命科学院微生态学研究所
第一作者单位检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心);  眼视光学院(生物医学工程学院)、附属眼视光医院
第一作者的第一单位检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心)
推荐引用方式
GB/T 7714
王震,叶明君,邹立林,等. SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究[J]. 温州医学院学报,2007,37(01):1-4.
APA 王震, 叶明君, 邹立林, 季敬璋, 陈秀枢, & 吕建新. (2007). SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究. 温州医学院学报, 37(01), 1-4.
MLA 王震,et al."SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究".温州医学院学报 37.01(2007):1-4.

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