题名 | SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究 |
其他题名 | Research on expression, purification and characterization of the SHV-4 extended-spectrum-β-lactamase in pET26b/BL(DE3) |
作者 | |
发表日期 | 2007-01-25 |
发表期刊 | 温州医学院学报 影响因子和分区 |
语种 | 中文 |
原始文献类型 | 学术期刊 |
关键词 | 超广谱β-内酰胺酶 SHV-4 表达 纯化 特性 |
摘要 | 目的:表达SHV-4型超广谱β-内酰胺酶,对纯化的SHV-4酶进行特性研究。方法:将SHV-4基因克隆到pET26b表达质粒,重组质粒转入E.coli BL21(DE3)构建工程菌,重组工程菌经摇瓶发酵后获得种子菌,种子菌转入发酵罐发酵,当菌体密度OD600为0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度为1.0mmol/L,于37℃培养6h。培养液离心收获菌体沉淀,其超声裂解上清液进行Ni2+亲和层析,获取的SHV-4酶进行分子量、纯度、等电点、最适条件、米氏常数、催化常数等特性进行分析。结果:SDS-PAGE电泳,等电聚焦电泳及系列的酶动力学实验表明SHV-4酶分子量约为30kD,纯度大于95%,等电点为7.9,最适pH值为6.0~8.0,最适温度为37℃,以头孢硝噻吩为底物测定的Km值为2.61×10-6mol/L,Kcat为258s,Kcat/Km为9.88×107mol-1·s-1·vL。结论:重组的SHV-4酶初步满足制成商品酶的条件。 |
资助项目 | 浙江省科技厅科研基金重点资助项目(2004C23018)。 |
ISSN | 1000-2138 |
卷号 | 37期号:01页码:1-4 |
DOI | 10.3969/j.issn.1000-2138.2007.01.001 |
页数 | 4 |
收录类别 | CNKI ; 万方 ; ISTIC |
URL | 查看原文 |
引用统计 | |
文献类型 | 期刊论文 |
条目标识符 | https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/134918 |
专题 | 眼视光学院(生物医学工程学院)、附属眼视光医院 检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心) 仁济学院_检验与生命科学学部 |
作者单位 | 1.温州医学院检验与生命科学学院浙江省医学遗传学重点实验室; 2.温州医学院检验与生命科学院微生态学研究所 |
第一作者单位 | 检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心); 眼视光学院(生物医学工程学院)、附属眼视光医院 |
第一作者的第一单位 | 检验医学院(生命科学学院、生物学实验教学中心) |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 王震,叶明君,邹立林,等. SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究[J]. 温州医学院学报,2007,37(01):1-4. |
APA | 王震, 叶明君, 邹立林, 季敬璋, 陈秀枢, & 吕建新. (2007). SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究. 温州医学院学报, 37(01), 1-4. |
MLA | 王震,et al."SHV-4型ESBL在pET26b/BL(DE3)中的表达纯化及其特性研究".温州医学院学报 37.01(2007):1-4. |
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WZYX200701000.CAJ(584KB) | 期刊论文 | 出版稿 | 开放获取 | CC BY-NC-SA | 浏览 下载 |
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