重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性

doi:10.3969/j.issn.1674-7666.2006.05.015

科研成果详情

题名	重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性
其他题名	Expression, Purification, and Refolding of Recombinant Human EGF-IL-18 Fusion Protein in E. coli
作者	潘建华 ; 彭颖 ; 郑昭暻 ; 吕建新
发表日期	2006-10-20
发表期刊	细胞生物学杂志影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	学术期刊
关键词	EGF-IL-18融合蛋白包涵体离子交换柱层析柱上复性
摘要	融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18。该基因在E.coliRosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在。以2mol/L尿素和1%TritonX-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%。复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-g基因表达的能力。该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础。
其他摘要	Abstract EGF-IL-18 fusion gene was amplified from pFUS-EGF-IL18 by PCR, and then was inserted into pET32a(+) to construct a prokaryotic expression vector pET32a(+)-EGF-IL-18. The target protein was highly expressed in E. coli Rosetta (DE3) and was mainly present in inclusion body observed by SDS-PAGE. After EGF-IL-18 inclusion body was repeatedly washed by 2 mol/L urea and l%Triton X-100, the denatured EGF-IL-18 was refolded by ion-exchange chromatography using the urea linear gradient strategy. It showed that ion-exchange chromatography not only facilitated the refol ding of EGF-IL-18, but also the target protein was purified at the same time. After being further purified with size-exclusion chromatography, EGF-IL-18 could effectively induce expression of interferon-ymRNA in PBMC in the presence of 0.5 \|0.g/ml Con A in vitro. This simple, effective method may be applied in the future to mass production of EGF-IL-18 and lay a solid base for detailed evaluation of bioactivities of EGF-IL-18 in vitro and in vivo.
资助项目	浙江省自然科学基金（No.302769）;浙江省医药卫生重点科技项目（No.2001ZD007）资助~~
ISSN	0253-9977
卷号	28 期号:05 页码:711-716
DOI	10.3969/j.issn.1674-7666.2006.05.015
页数	6
收录类别	CNKI ; CSCD ; 万方 ; PKU ; 北大核心 ; ISTIC
学科领域	细胞生物学
URL	查看原文
CSCD记录号	CSCD:2555554
引用统计
文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/88289
专题	眼视光学院（生物医学工程学院）、附属眼视光医院检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_细胞与分子生物医学研究所
作者单位	1.温州医学院细胞与分子医学研究所浙江省医学遗传学重点实验室 2.温州医学院细胞与分子医学研究所 3.浙江省医学遗传学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	潘建华,彭颖,郑昭暻,等. 重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性[J]. 细胞生物学杂志,2006,28(05):711-716.
APA	潘建华, 彭颖, 郑昭暻, & 吕建新. (2006). 重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性. 细胞生物学杂志, 28(05), 711-716.
MLA	潘建华,et al."重组人EGF-IL-18融合蛋白的表达纯化及复性".细胞生物学杂志 28.05(2006):711-716.