大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用

doi:10.3969/j.issn.1007-1954.2012.02.011

科研成果详情

题名	大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用
其他题名	Construction and identification of RNAi adenovirus vectors against GSK3β gene in rat and its promotion to the proliferation of hepatic oval cells
作者	谢元康 1; 钟骏桥 1; 蒋磊2; 季晓克1; 郭旭 1; 张启瑜1; 单云峰 1
发表日期	2012-03-15
发表期刊	肝胆胰外科杂志影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	学术期刊
关键词	GSK3β RNAi 腺病毒肝卵圆细胞大鼠
摘要	目的构建并鉴定特异性大鼠糖原合成酶激酶3β(GSK3β)基因siRNA腺病毒载体,观察其对肝卵圆细胞系WB-F344增殖的影响。方法用DNA重组技术将针对GSK3β基因不同部位所设计的2对shRNA序列克隆到高效RNAi真核表达质粒载体pGenesil-1.1中,构建shRNA表达载体pGenesil-1.1-GSK3β。分别酶切重组质粒及pDC312载体,转化连接,构建腺病毒载体pDC312-GSK3β,PCR扩增与鉴定。脂质体法介导腺病毒载体与骨架质粒pPE3-F11共转染293细胞,包装产生腺病毒颗粒AdD C3 12-GSK3β并测定滴度。取病毒上清感染WB-F34 4细胞,荧光显微镜观察细胞荧光含量,Western blotting检测GSK3β蛋白表达。CCK-8测定转染前后WBF-344增殖变化。结果经PCR酶切及Western blotting技术证实成功构建了针对大鼠GSK3β基因RNAi质粒pGenesil-1.1-GSK3β及GSK3β基因RNAi重组腺病毒载体AdDC312-GSK3β。Western blotting证实该重组腺病毒载体可抑制WBF-344细胞GSK3β的表达。CCK-8结果显示干扰GSK3β可促进WBF-344细胞增殖。结论成功构建了针对GSK3β基因RNAi的腺病毒载体,并在大鼠肝卵圆细胞系WBF-344中稳定表达,促进细胞增殖。
资助项目	国家自然科学基金资助项目（30700800）
ISSN	1007-1954
卷号	24 期号:02 页码:123-127
DOI	10.3969/j.issn.1007-1954.2012.02.011
页数	5
收录类别	CNKI ; 万方 ; ISTIC
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文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/68940
专题	附属第一医院_肝胆外科附属第一医院_内科实验室
作者单位	1.温州医学院第一附属医院肝胆外科; 2.温州医学院第一附属医院内科实验室
第一作者单位	温州医科大学
第一作者的第一单位	温州医科大学
推荐引用方式 GB/T 7714	谢元康,钟骏桥,蒋磊,等. 大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用[J]. 肝胆胰外科杂志,2012,24(02):123-127.
APA	谢元康., 钟骏桥., 蒋磊., 季晓克., 郭旭., ... & 单云峰. (2012). 大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用. 肝胆胰外科杂志, 24(02), 123-127.
MLA	谢元康,et al."大鼠GSK3β基因RNAi腺病毒载体的构建与鉴定及其对肝卵圆细胞增殖的促进作用".肝胆胰外科杂志 24.02(2012):123-127.

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