LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达

doi:10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.2015.05.001

科研成果详情

题名	LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达
其他题名	Construction of LIF gene lentiviral vector and its expression in human adipose-derived stem cells after transfection
作者	柯建明; 李佳; 谢甬淋; 毕涌; 张旭
发表日期	2015-05-08
发表期刊	中华全科医学影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	学术期刊
关键词	LIF 人脂肪间充质干细胞质粒重组慢病毒转染
其他关键词	Leukemia inhibitory factor ; Human adipose-derived stem cells (hASCs) ; Restructuring plasmid ; Lentiviral transfection
摘要	目的构建LIF慢病毒载体,转染人脂肪间充质干细胞,以此获得高表达LIF的人脂肪间充质干细胞,为LIF在人脂肪间充质干细胞介导的免疫调节效应机制研究中奠定基础。方法以PCR扩增得到LIF基因序列,采用质粒重组技术获得载有LIF基因的重组质粒,然后用重组质粒包装慢病毒。用胶原酶消化法分离培养人脂肪间充质干细胞,然后将慢病毒转染人脂肪间充质干细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,采用流式细胞技术检测慢病毒转染率,RT-PCR及Western blot技术检测LIF的表达水平,最后经SPSS 13.0软件对数据进行统计学分析,计量资料均以(x±s)表示,组间均数比较采用成对样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果通过PCR技术扩增得到LIF基因序列,并且成功构建带有LIF基因的重组质粒,重组质粒经限制性内切酶双酶切鉴定,得到大小为608 bp左右的条带,大小与LIF基因序列匹配,通过重组质粒转染293T细胞后获得慢病毒颗粒,滴度检测达1×108TU/ml。成功分离得到纯度高的h ASCs,慢病毒转染h ASCs后,流式细胞仪检测慢病毒转染率可达90%。RT-PCR及Western blot结果经统计学分析提示,转染后LIF的表达水平明显升高。结论携带人LIF基因的慢病毒载体可以有效转染h ASCs,并且表达LIF。
资助项目	浙江省自然科学基金（Y2101091,LY13H090010,LY14H130002）;浙江省高校“十二五”神经生物学重点学科（204-071006）
ISSN	1674-4152
卷号	13 期号:05 页码:700-702+712+863
DOI	10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.2015.05.001
页数	5
收录类别	CNKI ; 万方 ; 维普 ; ISTIC
URL	查看原文
CNKI分类号	R329.2 ; Q78
万方分类号	R741.05(神经病学) ; Q343(遗传学分支学科)
引用统计
文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/49490
专题	附属第一医院_神经内二科
作者单位	浙江省温州医科大学附属第一医院神经内二科
第一作者单位	附属第一医院_神经内二科
第一作者的第一单位	附属第一医院_神经内二科
推荐引用方式 GB/T 7714	柯建明,李佳,谢甬淋,等. LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达[J]. 中华全科医学,2015,13(05):700-702+712+863.
APA	柯建明, 李佳, 谢甬淋, 毕涌, & 张旭. (2015). LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达. 中华全科医学, 13(05), 700-702+712+863.
MLA	柯建明,et al."LIF基因慢病毒载体构建及其在人脂肪间充质干细胞的表达".中华全科医学 13.05(2015):700-702+712+863.

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SYQY201505006.CAJ（825KB）	期刊论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	浏览下载