恩格列净通过转录因子EB调控溶酶体自噬改善人原代脐静脉内皮细胞损伤

doi:10.3969/j.issn.2095-9400.2024.07.001

科研成果详情

题名	恩格列净通过转录因子EB调控溶酶体自噬改善人原代脐静脉内皮细胞损伤
其他题名	Empagliflozin regulating lysosomal autophagy through transcription factor EB to alleviate human umbilical vein endothelial cells injury
作者	吴春慧1; 吴慧洋1; 吴懋1; 牛超1; 朱进顺2; 褚茂平1
发表日期	2024-07-28
发表期刊	温州医科大学学报影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	Periodical
关键词	川崎病人脐静脉内皮细胞自噬内皮细胞损伤转录因子EB 钠-葡萄糖共转运体2
其他关键词	Kawasaki disease ; human umbilical vein endothelial cells ; autophagy ; endothelial cells injury ; transcription factor EB ; sodium-glucose cotransporter 2
摘要	目的:探究恩格列净(EMPA)改善人原代脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮损伤的机制.方法:用TNFα对HUVECs进行刺激,分为5组:①对照组:PBS处理;②TNFα组:TNFα刺激;③EMPA组:TNFα+EMPA;④BAF组:巴夫洛霉素A1(Baf A1)+TNFα+EMPA;⑤siTFEB组:细胞造模前预干扰转录因子EB(TFEB),余同EMPA组.造模24 h后收集细胞.分别进行Western blot检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、细胞间黏附分子(ICAM)、血管细胞黏附分子(VCAM)、溶酶体相关膜糖蛋白1(LAMP1)、P62、LC3、TFEB、pTFEB等蛋白的表达情况;细胞免疫荧光检测血管内皮VE-cadherin、LAMP1、TFEB等指标;单核细胞黏附、细胞渗漏、RNA测序检测、腺病毒转染GFP-LC3检测细胞内的LC3堆积量;慢病毒转染RFP-GFP-LC3检测细胞内的自噬流.结果:Western blot结果显示,TNFα组较对照组的P62、LC3、pTFEB表达水平升高(P＜0.01),LAMP1、TFEB下降(P＜0.01);EMPA组较TNFα组P62、LC3、pTFEB表达水平下降(P＜0.05),LAMP1、TFEB升高(P＜0.05);BAF组较EMPA组的P62、LC3表达量升高(P＜0.01);干扰TFEB后,siTFEB组较EMPA组的P62、LC3、表达量升高(P＜0.01),LAMP1下降(P＜0.01),免疫荧光结果显示TNFα组较对照组的TFEB在胞质堆积增加(P＜0.01),EMPA组较TNFα组TFEB在胞质堆积减少(P＜0.01),RNA测结果提示EMPA激活自噬通路;RFP-GFP-LC3双荧光结果显示EMPA组较TNFα组自噬溶酶体形成增多(P＜0.01).结论:EMPA通过TFEB增强溶酶体自噬,改善HUVECs内皮损伤.
其他摘要	Objective:To investigate the mechanism of how Empagliflozin(EMPA)improves endothelial injury in human primary umbilical vein endothelial cells(HUVECs).Methods:HUVECs were stimulated with were stimulated with TNFα,and divided into four groups:①Control group:treated with PBS;②TNFα group:stimulated with TNFα;③EMPA group:TNFα+EMPA;④BAF group:Bafilomycin A1(Baf A1)+TNFα+EMPA;⑤siTFEB group:transcription factor EB(TFEB)was pre-interfered before cell modeling,and the rest processing was the same as the EMPA group.After 24 hours of modeling,cells were collected.Western blot(detecting the expression of proteins such as lysosome-associated membrane protein 1(LAMP1),P62,LC3,VE-cadherin,TFEB,pTFEB,etc.),cell immunofluorescence(VE-cadherin,LAMP1,TFEB,etc.),monocyte adhesion,cell leakage,RNA sequencing,adenovirus transfection GFP-LC3(detecting the amount of LC3 accumulation in cells),lentivirus transfection RFP-GFP-LC3(detecting autophagy flow in cells)were performed.Results:Western blot results showed that,compared with the control group,the TNFα group significantly increased levels of P62,LC3,and pTFEB(P<0.01),while LAMP1 and TFEB levels decreased significantly(P<0.01).Compared with the TNFα group,the EMPA group showed decreased P62,LC3,and pTFEB levels(P<0.05)but increased LAMP1 and TFEB levels(P<0.05).The BAF group demonstrated higher P62 and LC3 expression than the EMPA group(P<0.01).After TFEB interference,the siTFEB group had increased P62 and LC3 expression compared with the EMPA group(P<0.01),with LAMP1 level decreased(P<0.01).Immunofluorescence results indicated that TNFα group had increased TFEB accumulation in the cytoplasm,compared with the control group(P<0.01),and the EMPA group had less TFEB cytoplasmic accumulation than the TNFα group(P<0.01).RNA measurements suggested that EMPA activated the autophagy pathway.The RFP-GFP-LC3 dual fluorescence results showed that the EMPA group had more autolysosome formation than the TNFα group(P<0.01).Conclusion:Empagliflozin enhances lysosomal autophagy through TFEB,thereby improving endothelial damage in HUVECs.
资助项目	82370509:国家自然科学基金;82100523:国家自然科学基金
ISSN	2095-9400
卷号	54 期号:7 页码:517-527
DOI	10.3969/j.issn.2095-9400.2024.07.001
页数	11
收录类别	万方 ; 维普 ; CNKI ; ISTIC
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文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/217270
专题	附属第二医院附属第一医院附属第二医院_心血管内科第二临床医学院、附属第二医院、育英儿童医院附属第一医院_肿瘤内科附属第二医院_内科
通讯作者	褚茂平
作者单位	1.温州医科大学附属第二医院儿童心血管内科,浙江温州 325027; 2.温州医科大学附属第一医院肿瘤内科,浙江温州 325015
第一作者单位	附属第二医院; 第二临床医学院，附属第二医院、育英儿童医院; 心血管内科; 内科
第一作者的第一单位	附属第二医院
推荐引用方式 GB/T 7714	吴春慧,吴慧洋,吴懋,等. 恩格列净通过转录因子EB调控溶酶体自噬改善人原代脐静脉内皮细胞损伤[J]. 温州医科大学学报,2024,54(7):517-527.
APA	吴春慧, 吴慧洋, 吴懋, 牛超, 朱进顺, & 褚茂平. (2024). 恩格列净通过转录因子EB调控溶酶体自噬改善人原代脐静脉内皮细胞损伤. 温州医科大学学报, 54(7), 517-527.
MLA	吴春慧,et al."恩格列净通过转录因子EB调控溶酶体自噬改善人原代脐静脉内皮细胞损伤".温州医科大学学报 54.7(2024):517-527.