融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）的构建及真核表达

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题名	融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）的构建及真核表达
作者	隋文君; 苏世振; 胡望雄; 李红智; 布立敬
会议录名称	遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	中国会议
会议名称	2010中国青年遗传学家论坛
会议地点	中国浙江嘉兴
关键词	erbB2 融合基因表达载体肿瘤治疗
摘要	目的:构建含融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）的T细胞株,为erbB2过表达肿瘤的靶向基因治疗奠定实验基础。方法:利用SWISS MODEL预测该融合蛋白的三级结构。利用PCR的方法分别从重组pPIC9k、重组pBullet和pSecTag2B上扩增出3段基因片段,即片段anti-erbB2-scFv（简称A）、片段Fc-CD28-CD3（ζ）（简称B）和信号肽序列（简称S）。利用SOE-PCR将3段序列连接形成融合基因片段S-A-B。经TA克隆扩增及鉴定后,将融合基因片段与逆转录病毒表达载体pLNCX相连构建重组真核表达载体,电转染人淋巴瘤T细胞株Jurkat,G418筛选后用流式细胞术检测融合蛋白稳定表达情况。结果:经预测在anti-erbB2 scFv与Fc基因片段之间不加连接肽的融合蛋白,在三级结构上可形成更佳的功能构象。经PCR、酶切及测序鉴定均证实成功构建重组真核表达载体pLNCX/S-A-B（在A与B基因片段之间不加linker）。经流式细胞术检测,在转染的Jurkat细胞中融合蛋白表达率约为56.17%。结论:应用分子克隆的方法成功地构建了重组真核表达载体pLNCX/anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）,融合基因能够在淋巴瘤T细胞株中表达,为制备含该融合基因的原代T淋巴细胞,进行erbB2过表达肿瘤的靶向基因治疗研究奠定了基础。
页码	1
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收录类别	万方 ; CNKI
发表日期	2010-11-04
文献类型	会议论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/130889
专题	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_细胞生物学与遗传学系
作者单位	温州医学院浙江省重点医学遗传学实验室
第一作者单位	温州医科大学
第一作者的第一单位	温州医科大学
推荐引用方式 GB/T 7714	隋文君,苏世振,胡望雄,等. 融合基因anti-erbB2 scFv-Fc-CD28-CD3（ζ）的构建及真核表达[C],2010:1.

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ZGYL201011001060.CAJ（25KB）	会议论文	出版稿	开放获取	CC BY-NC-SA	浏览下载