霍乱弧菌O139mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定

科研成果详情

题名	霍乱弧菌O139mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定
其他题名	Cloning, expression and immunoreactivity of mshA gene of Vibrio cholerea O139
作者	尹铁球 1; 楼永良1; 杜季梅1; 彭颖2; 曾爱兵3
发表日期	2006
发表期刊	中国人兽共患病学报影响因子和分区
语种	中文
原始文献类型	期刊论文
关键词	霍乱弧菌O139 mshA基因克隆表达免疫反应性
摘要	目的克隆霍乱弧菌O139临床菌株的甘露糖敏感血凝素（Mannose-Sensitive Hemagglutinin，MSHA）基因，构建原核表达系统，鉴定重组表达产物的免疫反应性。方法高保真PCR扩增mshA基因，T—A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统pET-28a（＋）-mshA—E．coli BL21（DE3），IPTG诱导目的重组蛋白（rMSHA）表达、Ni—NTA亲和层析法收集蛋白；Western blot鉴定其免疫反应性。结果所克隆的mshA基因与GenBank报道的（AE004128）序列完全一致。构建的mshA基因原核表达系统pET-28a（＋）-mshA-E．coli BL21（DE3）表达量占细菌总蛋白的20％以上。表达的蛋白（约20kD）可与His单克隆抗体发生特异性免疫结合。结论成功构建了霍乱弧菌O139mshA基因的高效原核表达系统，表达的rMSHA蛋白有良好的免疫反应性，为进一步研制MSHA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。
其他摘要	To clone mshA gene and construct its prokaryotic expression system, and to identify immunoreactivity of the target recombinant protein（rMSHA）. The mshA gene was amplified by high fidelity PCR and then T-A cloned into the new type of prokaryotic expression system pET-28a（＋）-mshA-E, coli BL21DE3. The output of rMSHA was measured by SDSPAGE and Ni-NTA affinity chromatograthy was performed to collect rMSHA. The immunity of rMSHA was determined by Western blot. DNA sequence analysis showed that the nucleic acid sequence of the cloned mshA gene was identical to that published in GenBank. The output of rMSHA expressed was as high as 20% or above of the total bacterial proteins. A 20kD fusion protein was detected by SDS-PAGE and its his tag was recognized by its MAb in Western blot. It is evident that the fusion protein rMSHA of Vibrio cholerea O139 is well expressed in prokaryotic expression system,with fine immunoreactivity.
资助项目	浙江省教育厅科研计划项目
ISSN	1002-2694
卷号	22 期号:5 页码:403-406
收录类别	CSCD
学科领域	医药、卫生 ; 基础医学
CSCD记录号	CSCD:2552153
引用统计
文献类型	期刊论文
条目标识符	https://kms.wmu.edu.cn/handle/3ETUA0LF/100069
专题	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_细胞与分子生物医学研究所检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）_生物学实验教学中心
作者单位	1.温州医学院检验医学院, 温州, 325035 ; 2.温州医学院细胞与分子医学研究所, 温州, 325035 ; 3.温州医学院生物学实验教学中心, 温州, 325035
第一作者单位	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）
第一作者的第一单位	检验医学院（生命科学学院、生物学实验教学中心）
推荐引用方式 GB/T 7714	尹铁球,楼永良,杜季梅,等. 霍乱弧菌O139mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[J]. 中国人兽共患病学报,2006,22(5):403-406.
APA	尹铁球, 楼永良, 杜季梅, 彭颖, & 曾爱兵. (2006). 霍乱弧菌O139mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定. 中国人兽共患病学报, 22(5), 403-406.
MLA	尹铁球,et al."霍乱弧菌O139mshA基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定".中国人兽共患病学报 22.5(2006):403-406.